Выделение мембранных белков - Определение ферментативной активности

Содержание
Выделение мембранных белков
Структура мембранных белков
Выделение мембранных белков
Солюбилизация мембранных белков. Периферические белки
Интегральные белки
Характеристика очищенных интегральных мембранных белков
Определение молекулярной массы субъединиц (электрофорез в пааг)
Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов
Метод радиационной инактивации
Спектральные методы
Метод кругового дихроизма
Инфракрасная спектроскопия и спектроскопия комбинационного рассеяния
ЯМР-спектроскопия
Определение ферментативной активности
Изучение стехиометрии субъединиц
Изучение трехмерной структуры с помощью рентгеновской дифракции и реконструкции изображения. Кристаллизация мембранных белков
Реконструкция изображения и двумерные кристаллы
Пример структурных исследований мембранных белков. Структура поринов
Заключение
Список литературы
Все страницы

 

Определение ферментативной активности

Одним из наиболее важных методов характеристики очищенных мембранных белков несомненно является определение биохимической активности. При этом используются в основном такие же критерии, как и для растворимых белков, но могут возникать и свои трудности. Первая из них связана с тем, что биохимическая активность мембранных белков часто очень сильно зависит от связывания с белком липидов и детергентов. Потеря активности может быть как обратимой, так и необратимой. Целесообразно иметь какую-то оценку удельной активности исследуемого белка in vivo или в составе мембран до солюбилизации. Избыток детергента может оказывать ингибирующий эффект, например за счет разбавления неполярных субстратов в популяции мицелл и уменьшения ферментативной активности. Измеряя активность любого мембранного белка, необходимо иметь в виду, что in situ он находится в окружении липидов, обеспечивающих оптимальную активность. Вторая проблема связана с белками, обладающими "трансбислойной" активностью; примерами могут служить белки, образующие каналы, и транспортные белки. В этих случаях необходимо учитывать перемещение растворенных веществ из одного компартмента в другой (например, внутрь липосом и наружу).



 
Баннер












Регистрация доменов

Зарегистрируй себе домен!
Имя:


defin.ru



Конвертер величин


Что конвертируем:сколько:
соответствует:

Посетители

Сейчас 26 гостей онлайн