Группа пневмовирусов - Радиоиммунопреципитация

Содержание
Группа пневмовирусов
Номенклатура
Выделение вируса
Хранение вируса
Цитопатогенное действие
Методы повышения инфекционное (тм)
Методы стабилизации инфекционное
Методы определения инфекционности
Гемагглютинация
Гемадсорбция
Иммунофлуоресцентные методы
Твердофазный иммуноферментный анализ
Аналитические методы. Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация. Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных рсв клетках
Радиоиммуноанализ
Радиоиммунопреципитация
Метод выявления дефектных интерферирующих частиц
Электронная микроскопия
Морфология вирионов
Морфогенез вирионов
Сканирующая электронная микроскопия
Локализация и количественное определение вирусных антигенов по связыванию стафилококков
Концентрирование вируса
Очистка и радиоактивное мечение рсв
Градиентное центрифугирование
Очистка рсв методом изопикнического центрифугирования
Радиоактивное мечение вирионной рнк
Анализ вирусных рнк и белков методом электрофореза в полиакриламидном геле. Анализ белков
Анализ рнк
Очистка матричной рнк для трансляции
Молекулярное клонирование и олигонуклеотидное секвенирование
Очистка вирусных белков. Вирусные полипептиды
Очистка капсидного белка
Очистка вирионных гликопротеинов
Специальные биологические методы. Получение моноклональных антител
Выделение температурно-чувствительных мутантов
Получение персистентно инфицированных клеточных культур
Все страницы

 

Радиоиммунопреципитация

Радиоиммунопреципитация проводится стандартным методом, описанным, например, Ферни и Герином и Уордом и др. Для РСВ применяют следующую методику.

1. "Монослойные культуры клеток в чашках Петри диаметром 50 мм заражают РСВ с множественностью инфекции более 1 БОЕ/кл. Через определенные промежутки времени после заражения проводят импульсное мечение. Для этого культуральную среду в чашках заменяют на 1 мл PBS, содержащего 30 мкКи - метионина и 25 мкКи - цистеина, и инкубируют чашки при 31С 1 ч.

2. Радиоактивный раствор сливают и монослой промывают охлажденным PBS.

3. Клетки снимают со стекла с помощью стерильной резиновой палочки и осаждают центрифугированием.

4. Клетки ресуспендируют в 200 мкл лизирующего буфера, инкубируют суспензию 30 мин в ледяной бане, затем интенсивно перемешивают.

5. Ядра и клеточный дебрис удаляют центрифугированием 5 мин при 10 000 g.

6. Лизат осветляют инкубацией с 50 мкл 10% -ной суспензии фиксированных формалином стафилококков или с 50 мкл суспензии покрытых белком-А гранул 30 мин при 0С.

7. Стафилококки удаляют центрифугированием. К 50 мкл лизата добавляют 10 мкл гипериммунной сыворотки, перемешивают и инкубируют 3 ч во льду.

8. Добавляют 100 мкл суспензии стафилококков, перемешивают и инкубируют смесь 30 мин при комнатной температуре.

9. Иммунные комплексы осаждают центрифугированием 20 с при 10 000 g.

10. Осадок 3 раза промывают раствором, содержащим 500 мМ LiCl, 100 мМ трис-HCl, рН 8,5.

11. Осадок после промывки ресуспендируют в 50 мкл смеыг для диссоциации, кипятят 2 мин и либо немедленно наносят на гель для электрофореза, либо хранят при - 20 С.



 
Баннер












Регистрация доменов

Зарегистрируй себе домен!
Имя:


defin.ru



Конвертер величин


Что конвертируем:сколько:
соответствует:

Посетители

Сейчас 39 гостей онлайн