Группа пневмовирусов - Анализ рнк

Содержание
Группа пневмовирусов
Номенклатура
Выделение вируса
Хранение вируса
Цитопатогенное действие
Методы повышения инфекционное (тм)
Методы стабилизации инфекционное
Методы определения инфекционности
Гемагглютинация
Гемадсорбция
Иммунофлуоресцентные методы
Твердофазный иммуноферментный анализ
Аналитические методы. Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация. Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных рсв клетках
Радиоиммуноанализ
Радиоиммунопреципитация
Метод выявления дефектных интерферирующих частиц
Электронная микроскопия
Морфология вирионов
Морфогенез вирионов
Сканирующая электронная микроскопия
Локализация и количественное определение вирусных антигенов по связыванию стафилококков
Концентрирование вируса
Очистка и радиоактивное мечение рсв
Градиентное центрифугирование
Очистка рсв методом изопикнического центрифугирования
Радиоактивное мечение вирионной рнк
Анализ вирусных рнк и белков методом электрофореза в полиакриламидном геле. Анализ белков
Анализ рнк
Очистка матричной рнк для трансляции
Молекулярное клонирование и олигонуклеотидное секвенирование
Очистка вирусных белков. Вирусные полипептиды
Очистка капсидного белка
Очистка вирионных гликопротеинов
Специальные биологические методы. Получение моноклональных антител
Выделение температурно-чувствительных мутантов
Получение персистентно инфицированных клеточных культур
Все страницы

 

Анализ рнк

Радиоактивно меченную РНК из очищенных вирионов или из цитоплазмы зараженных РСВ клеток можно проанализировать электрофорезом в 1,5% -ном геле агарозы, содержащем 6 М мочевину, по следующей методике.

1. Для приготовления геля размером 50X17X0,3 см готовят отдельно следующие растворы: а) 120 мл 4,5% -ной агарозы; для растворения агарозы суспензию обрабатывают в микроволновой печи или автоклавируют ее; б) 1,5-кратный концентрат раствора мочевины в цитратном буфере; для этого к 129,6 г мочевины добавляют 9 мл концентрированного 1 М цитратного буфера и растворяют, доводя объем водой до 240 мл.

2.1,5-кратный буфер нагревают и смешивают с 3-кратным концентратом агарозы.

3. Гель заливают на холоду в горизонтальный аппарат для электрофореза в 3 стадии, перерывы между стадиями составляют 45 мин.
4. В гель немедленно вводят гребенку.

5. Гель используют для электрофореза через 2-3 ч после заливки. Гребенку вынимают, промывают ячейки буфером с мочевиной и заполняют их тем же буфером. В ячейки вносят образцы, смешанные с буфером для нанесения.

6. Электрофорез проводят на холоду при градиенте напряжения 5 В/см в течение 18 ч. Основные растворы готовят следующим образом.

1 М цитратный буфер, рН 3,0: смешивают 1 М растворы лимонной кислоты и цитрата натрия до достижения рН 3,0. Буфер для электрофореза: 1 М. цитратный буфер разводят в 40 раз, получая 0,025 М цитратный буфер, рН 3,0 Буфер для нанесения образцов: 0,025 мл 1 М цитратного буфера, 3,6 г 6 М мочевины, 2 г 20% -ной сахарозы, 0,1 мл 0,005% -ного бромфенолового синего, объем доводят водой до 10 мл. Буфер с 6 М мочевиной: 3,6 г мочевины, 0,25 мл 1 М цитрата, рН 3,0; объем доводят до 10 мл дистиллированной водой.



 
Advego - наполнение сайтов информацией












Регистрация доменов

Зарегистрируй себе домен!
Имя:


defin.ru



Конвертер величин


Что конвертируем:сколько:
соответствует:

Посетители

Сейчас 127 гостей онлайн