Группа пневмовирусов - Специальные биологические методы. Получение моноклональных антител

Содержание
Группа пневмовирусов
Номенклатура
Выделение вируса
Хранение вируса
Цитопатогенное действие
Методы повышения инфекционное (тм)
Методы стабилизации инфекционное
Методы определения инфекционности
Гемагглютинация
Гемадсорбция
Иммунофлуоресцентные методы
Твердофазный иммуноферментный анализ
Аналитические методы. Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация. Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных рсв клетках
Радиоиммуноанализ
Радиоиммунопреципитация
Метод выявления дефектных интерферирующих частиц
Электронная микроскопия
Морфология вирионов
Морфогенез вирионов
Сканирующая электронная микроскопия
Локализация и количественное определение вирусных антигенов по связыванию стафилококков
Концентрирование вируса
Очистка и радиоактивное мечение рсв
Градиентное центрифугирование
Очистка рсв методом изопикнического центрифугирования
Радиоактивное мечение вирионной рнк
Анализ вирусных рнк и белков методом электрофореза в полиакриламидном геле. Анализ белков
Анализ рнк
Очистка матричной рнк для трансляции
Молекулярное клонирование и олигонуклеотидное секвенирование
Очистка вирусных белков. Вирусные полипептиды
Очистка капсидного белка
Очистка вирионных гликопротеинов
Специальные биологические методы. Получение моноклональных антител
Выделение температурно-чувствительных мутантов
Получение персистентно инфицированных клеточных культур
Все страницы

 

Специальные биологические методы. Получение моноклональных антител

Моноклональные антитела к нескольким белкам РСВ были получены стандартными методами. Ниже приведен типичный протокол.

1. Мышам линии Balb/c внутрибрюшинно вводят зараженные РСВ клетки. Через 10 сут. инокуляцию повторяют.

2. Селезенки иммунизированных мышей суспендируют в среде RPM1 1640, забуференной бикарбонатом натрия и содержащей пенициллин, гентамицин, пируват натрия, L-глютамин и ЭТС.

3. Клетки селезенки иммунизированных мышей сливают с клетками мышиной миеломы, например Balb/c NS1/1, выращиваемой в той же среде. При этом смешивают 3-10 (в 7 степени) клеток селезенки с таким же количеством клеток миеломы. Клетки центрифугируют 10 мин при 200 g и 1 мин выдерживают при 37 С. Для слияния клеток по каплям добавляют 1 мл 50% -ного ПЭГ 4000 с 5% ДМСО.

4. Суспензию инкубируют 90 с при 37 С и останавливают процесс слияния, добавляя 20 мл среды.

5. Клетки осаждают центрифугированием и промывают средой. Осадок ресуспендируют в среде ГАТ и распределяют по плоскодонным лункам планшета для иммунологических реакций.

6. Клетки инкубируют на питательном слое из макрофагов, подготовленном за сутки до слияния; каждая лунка должна содержать 10перитонеальных макрофагов здоровой мыши.

7. Через 6 сут после начала инкубации в каждую лунку вносят по 50 мкл среды ГАТ.

8. Через 9-12 сут после слияния проверяют активность и специфичность продуцируемых антител методом ELISA с антигенами РСВ.

9. Гибридомы, продуцирующие специфические антитела, клонируют методом предельного разведения в планшете для иммунологических реакций, используя макрофаги или клетки селезенки в качестве фидера. Клонирование проводят дважды. Гибридомы считают стабильными, если 95% клонов продуцируют специфические антитела.



 












Регистрация доменов

Зарегистрируй себе домен!
Имя:


defin.ru



Конвертер величин


Что конвертируем:сколько:
соответствует:

Посетители

Сейчас 63 гостей онлайн